光学显微镜的使用规程

（一） 实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 6～7 cm左右。

（二） 打开光源开关，调节光强到合适大小。

（三） 转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处。调整双目镜筒间距及聚光器的高度，把虹彩光圈调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。

（四） 将所要观察的玻片放在载物台上，通过调整玻片推进器使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央。

（五） 先用低倍镜观察（物镜4X、目镜10x）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升至最高处（我们使用的显微镜都有保护装置，调整到最高处时不会压碎玻片）。转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

（六） 如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台的玻片推进器。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。

（七） 如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。

（八） 在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节虹彩光圈的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。

（九） 如需要更换玻片，应先将高倍镜换成低倍镜，取下原玻片，换上新玻片，重新从低倍镜开始观察。

（十） 观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，或将低倍镜转至通光孔处，然后将虹彩光圈调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤（特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净），检查处理完毕后即可装箱。 )=-

2．制作洋葱鳞叶内表皮临时装片，进行显微镜操作练习，观察植物细胞的基本结构。

2.1 取一片干净的载玻片，用滴管在其中央滴一滴蒸馏水。玻片除要求无色、平滑、透明度好之外，使用时应将载玻片和盖玻片用纱布擦试干净。因盖玻片极薄，注意擦试时不要用力过猛使之破碎伤手。若玻片很脏，可用酒精擦试或用碱水煮片刻，再用清水洗净擦干。

2.2 取洋葱鳞叶一小片，用解剖刀在其内表面划一个边长为0.5cm的正方形，然后用镊子撕下正方形内表皮，迅速置于玻片上的水滴中，并展平。水可以保持材料呈新鲜状态，避免材料干缩，同时使物像透光均匀而显得更加清晰。

2.3 盖上盖玻片。用镊子轻夹盖玻片的一边，使盖玻片的相对另一边先接触载玻片上的水滴，而后慢慢地把盖玻片轻轻盖在材料上，尽量避免气泡产生。如有气泡，可用镊子从盖玻片的一侧掀起，然后再慢慢重新盖上。如有水溢出盖玻片，特别是染液，一定要将其用吸水纸吸干净。

2.4 将制好的装片放在显微镜下观察。

2.5 加染液染色：染液染色可在用水加盖玻片后进行。方法是滴一滴染液在盖玻片旁，用吸水纸在另一边吸，直到染液充满为止。另一种方法是把盖玻片取下，用吸水纸把材料周围的水分吸除，然后滴上一滴染料，经2-3分钟，加上盖玻片即可。细胞染色后，在低倍镜下，选择一个比较清楚的区域，把它移至视野中央，再转换高倍镜仔细观察一个典型植物细胞的构造，识别下列各部分：

①细胞壁 洋葱表皮每个细胞周围有明显界限，被I2－KI染液染成淡黄色，即为细胞壁。细胞壁由于是无色透明的结构，所以观察时细胞上面与下面的平壁不易看见，而只能看到侧壁。

②细胞核 在细胞质中可看到，有一个圆形或卵圆形的球状体，被I2－KI染液染成黄褐色，即为细胞核。细胞核内有染色较淡且明亮的小球体1-多个，即为核仁。幼嫩细胞，核居中央；成熟细胞，核偏于细胞的侧壁，多呈半球形或纺锤形。

③细胞质 细胞核以外，紧贴细胞壁内侧的无色透明的胶状物，即为细胞质，I2－KI染色后，呈淡黄色，但比壁还要浅一些。在较老的细胞中，细胞质是一薄层紧贴细胞壁，在细胞质中还可以看到许多小颗粒，是线粒体、白色体等。

④液泡 为细胞内充满细胞液的腔穴，在成熟细胞里，可见1个或几个透明的大液泡，位于细胞中央。注意在细胞角隅处观察，把光线适当调暗，反复旋转细调节器，能区分出细胞质与液泡间的界面。

在观察过程中，有的表皮细胞中看不到细胞核，这是因为在撕表皮时把细胞撕破，有些结构已从细胞中流出。

3．使用注意事项：

① 显微镜是精密仪器，使用时一定严格遵守操作规则，不许随意拆修。② 随时保持显微镜清洁。观察临时装片时，一定要将盖玻片四周溢出的水或其他液体用吸水纸吸干净，以免污染镜头。已被污染的镜头要用镜头纸擦试。③ 观察时，坐姿要端正，双目同时张开，切勿睁一眼、闭一眼或用手遮挡一只眼。④ 观察玻片时，一定要按先低倍、后高倍物镜顺序使用。细调焦轮是在观察到物像而不够清晰时使用，切忌沿同一方向不停地转动细调焦轮。

4．生物绘图方法

4.1 要求：细胞和组织绘图是根据显微镜下的观察内容绘制的，因此，首先要充分观察了解所绘材料的特点、排列及比例。选择有代表性的、典型的部位进行绘图。客观真实地反映材料的自然状态。即生物绘图要求具备高度的科学性和真实感，形态正确、比例适当、清晰美观。

4.2基本步骤

（1）根据绘图纸张大小和绘图的数目，安排好每个图的位置及大小，并留好注释文字和图名的位置。

（2）将图纸放在显微镜右方，依观察结果，先用HB型铅笔轻轻勾一个轮廓，确认各部分比例无误后，再把各个部分勾画出来。

（3）生物绘图通常采用“积点成线，积线成面”的表现手法，即用线条和圆点来完成全图。绘线条时要求所有线条都均匀、平滑，无深浅、虚实之分，无明显的起落笔痕迹，尽可能一气呵成不反复。圆点要点得圆、点得匀，其疏密程度表示不同部位颜色深浅。

（4）绘好图之后，用引线和文字注明各部分名称。注字应详细、准确，且所有注字一律用平行引线向右一侧注明，同时要求所有引线右边末端在同一垂直线上。在图的下方注明该图名称，即某种植物、某个器官的某个制片和放大倍数。